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產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 1. 細(xì)胞鋪板：對收集的細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后接種細(xì)胞； 2. 按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做 5-7 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組 4-6 個(gè)復(fù)孔； 3. 接種后培養(yǎng) 2-4 小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后每 100μL 培養(yǎng)基加 10μL（培養(yǎng)基體積的 10%） CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定 OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)，OD 值為縱 坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前 提條件是試驗(yàn)條件完全一致）。 二、細(xì)胞活性檢測 1. 在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液 (100μL/孔) ，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí)； 2. 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要產(chǎn)生氣泡) ； 3. 將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)； 4. 用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。 三、細(xì)胞增殖-毒性檢測 1. 在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液 (100μL/孔) ，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí)； 2. 向培養(yǎng)板加入不同濃度的待測藥物； 3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間； 4. 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要產(chǎn)生氣泡)； 5. 將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)； 6. 用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。 四、計(jì)算公式 細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0 加藥）-A（空白）]×100 A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度 A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度 *細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 酚紅和血清對 CCK-8 的檢測不會造成干擾，可通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去， 因此不會對檢測造成影響。 2. 若細(xì)胞毒性非常低，加入 WST-8 顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最 佳測定時(shí)間。 3. 如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并 用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的 情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。 4. 加入藥物中如含有金屬，對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為 1 mM 的氯化亞鉛、氯化鐵、 硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是 10mM 將會 100%抑制。 5. 不同的細(xì)胞系，加入 CCK-8 試劑后的反應(yīng)時(shí)間不同，建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù) 量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。 6. 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為 1000 個(gè)/孔 (100μL 培養(yǎng)基)。檢 測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2500 個(gè)/孔 (100μL 培養(yǎng)基)。如 果要使用 24 孔板或 6 孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積 的 10%加入 CCK-8 溶液。 7. 建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。同時(shí)避免產(chǎn)生氣泡，否則會干擾 OD 值讀數(shù)。 8. 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。 9. 使用 96 孔板進(jìn)行檢測時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，需要注意蒸發(fā)問題，可以采取棄用周 圍一圈的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液。 10.以下方法可以終止 CCK-8 反應(yīng) (96 孔板)：(a). 在顯色反應(yīng)后，將培養(yǎng)板放置 4°C 冰箱 內(nèi)。(b). 每孔加 10μL 0.1M HCl 溶液。(c). 每孔加 10μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫 酸鈉) 溶液，反應(yīng)停止后，應(yīng)在 24 小時(shí)內(nèi)測定。 11.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 4°C 避光保存 12 個(gè)月；-20°C 避光保存 24 個(gè)月。 |
產(chǎn)品詳情
細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）是一種基于 WST-8 在電子耦合試劑存在 的情況下，被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan），生成的甲臜物的 數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測得的吸光值即可間接反映活細(xì) 胞的數(shù)量。細(xì)胞增殖越快，則顏色越深，細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺，對于同樣的細(xì)胞，顏 色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。CCK-8 廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度 檢測。
BDBIO 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK8）僅一管已經(jīng)配制好的含有 WST-8 的 CCK-8 溶液，無須再 進(jìn)行任何配制操作，并且不必洗滌或收集細(xì)胞，使用便捷，加入 CCK-8 溶液顯色后，可以在 不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，檢測時(shí)間更加靈活，便于找到最佳測定時(shí)間，可以用于大批量 樣品的檢測。
