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產品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 一、細胞準備（以 24 孔板為例） 貼壁細胞：轉染前一天，胰酶消化細胞并計數，按照每孔 2-8×105個細胞的量進行鋪板，使 其在轉染時密度為 80-100%。 懸浮細胞：轉染當天，配制 DNA 復合物之前，24 孔板中細胞鋪板，每 500μL 生長培養基中 加入 4-10×105 細胞。 * 鋪板時可使用抗生素，但轉染時候切記移除抗生素。 * 高細胞密度仍具高轉染效率，建議細胞密度大于 90%。 二、轉染復合物的配置： 1. 使用 50μL 無血清培養基（如 DMEM 或 Opti-MEM 培養基）稀釋 0.5μg DNA，渦旋混 勻。 2. 使用 50μL 無血清培養基（如 DMEM 或 Opti-MEM 培養基）稀釋 0.6-2.5μL 轉染試劑。 轉染試劑稀釋后室溫孵育 2-5 min（在 30 min 內同稀釋的 DNA 混合，保溫時間過長會 降低活性）。 * 如果 DMEM 作為脂質體核酸轉染試劑的稀釋液，必須在 5 min 內同稀釋的 DNA 混合。 * 轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度優化最佳使用 量。 三、細胞轉染： 1. 混合稀釋的 DNA 和稀釋的轉染試劑（總體積 100μL），輕輕混勻，并在室溫孵育 20min。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染。DNA-轉染試劑復合物室溫至少穩定保 存 5h。 2. 將 100μL DNA-轉染試劑復合物滴加到 24 孔細胞板中（細胞板中培養基為 400μL），輕 輕晃動細胞板混勻。 * 如需無血清條件轉染，加入復合物前將含血清培養基替換為無血清培養基即可。 3. 37℃，5% CO2 培養箱培養 18-48 h，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換 培養基。如需要，可在轉染后 4-6 h 后更換生長培養基，不會降低轉染效率。 |
| 注意事項 | 1. 本產品可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要換培養基。但是，制備轉染復合 物時要求用無血清培養基稀釋 DNA 和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。 2. 高細胞密度仍具高轉染效率，建議細胞密度大于 90%，有利獲得更高的蛋白表達。 3. 鋪板時可使用抗生素，但轉染時應換液將抗生素移除。 4. 使用高純度的 DNA 或 RNA 有助于獲得較高的轉染效率，并去除內毒素。 5. 本產品置于 4 度保存，不可冷凍。避免反復或長時間開蓋，避免脂質體氧化而影響轉染效 率。 6. 初次使用建議優化 DNA 和轉染試劑用量以獲得最佳轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例， 通常推薦是 1:2-1:3，例如使用 0.5 μg DNA 和 1-1.5 μL 轉染試劑。可根據試劑情況進行 優化調整。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 2-8℃保存，有效期 24 個月。 |
產品詳情
BDBIO 超級轉染試劑（替代 Lipo6666）是一種新型高效的陽離子聚合物。它可以與核酸 （包括質粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一種復合物將核酸轉運到真核細胞內，適 用于大部分真核細胞的細胞轉染，對難轉染細胞表現出更大優勢。本產品細胞毒性低，轉染 后可不換液，也可在 4-6 小時后更換新鮮培養基。對高密度細胞保持高轉染效率，在細胞密 度 90%以上仍具有很高的轉染效率。血清不影響轉染效率，可將轉染復合物直接加入完全培 養基中，可減少去除血清對細胞的損傷。用量少，通常情況下對于 24 孔板轉染，每次用 1- 2μL，1mL 可做 500-1000 次轉染；對于 6 孔板，每次用 4-8μL，1mL 約可做 125-250 次 轉染。
