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產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. 試劑配制： 完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基B：2-8℃過(guò)夜融化成脂誘導(dǎo)添加物B，使用前須37℃復(fù)溫30分鐘至內(nèi)容 物充分解凍為透明無(wú)沉淀。將人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)基礎(chǔ)培養(yǎng)基平均分成2份，各 45ml，加入成脂誘導(dǎo)添加物B配制成完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基B，充分混勻。 完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基C：2-8℃過(guò)夜融化成脂誘導(dǎo)添加物C，加入人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)基 礎(chǔ)培養(yǎng)基的另一份45 ml，配制成完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基C，充分混勻，2-8 ℃保存。 油紅O染液（工作液）：取油紅O儲(chǔ)液，與蒸餾水以3：2的比例混合均勻，中性濾紙過(guò) 濾，即配制成了油紅O染液（工作液），油紅O染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。 2. 培養(yǎng)皿處理：加適量室溫復(fù)溫的包被溶液到培養(yǎng)器皿中，輕輕搖動(dòng)使其覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器 皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液，室溫晾干。 3. 準(zhǔn)備所需誘導(dǎo)分化的MSC，當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)85%左右時(shí)，用消化液消化細(xì)胞，并用MSC完 全培養(yǎng)基重懸。 4. 按照3×104 cells/cm2的密度將細(xì)胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔MSC完全培養(yǎng)基 （需自備）2 ml，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（細(xì)胞密度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況進(jìn)行調(diào)整）。 5. 當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)90%時(shí)，棄去培養(yǎng)上清，每孔添加完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基B 2 ml/孔，37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 6. 誘導(dǎo)培養(yǎng)72小時(shí)后棄去原培養(yǎng)上清，添加完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基C 2 ml/孔，37℃、5%CO2培 養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。 7. 繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)24小時(shí)后棄去原培養(yǎng)基，添加完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基B 2 ml/孔，37℃、5%CO2 培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。 8. 重復(fù)步驟6、7約3-5次，待細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯脂滴時(shí)更換為完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基C繼續(xù)培養(yǎng)（一 般骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)4天左右高倍鏡下能看到細(xì)胞漿內(nèi)有較多數(shù)量的圓形亮泡，5- 9天融合為較大的亮泡，這些結(jié)構(gòu)圍繞在細(xì)胞核周圍，較大的與細(xì)胞核大小相當(dāng)。狀態(tài)較 好的細(xì)胞10天內(nèi)可結(jié)束培養(yǎng)過(guò)程，若10天后仍未見(jiàn)脂滴結(jié)構(gòu)，請(qǐng)注意分析操作步驟與其 他原因。臍帶等組織來(lái)源的細(xì)胞時(shí)間可能不同，需根據(jù)具體情況判斷）。 9. 每2天更換新鮮完全誘導(dǎo)培養(yǎng)基C，繼續(xù)培養(yǎng)至脂滴足夠大時(shí)培養(yǎng)結(jié)束（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選 擇培養(yǎng)結(jié)束時(shí)間，若成脂面積過(guò)大或脂滴過(guò)大導(dǎo)致連成片則不利于結(jié)果的呈現(xiàn)，建議提 前終止。誘導(dǎo)終止時(shí)間以脂滴大小或擬定的對(duì)照時(shí)間為準(zhǔn)，一般最長(zhǎng)不超過(guò)40天）。 10. 誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，棄去培養(yǎng)上清，DPBS洗細(xì)胞兩次，4%中性多聚甲醛溶液2ml/孔室溫 固定細(xì)胞20分鐘（培養(yǎng)結(jié)束時(shí)或中途也可以選擇其他檢測(cè)方法，如基因表達(dá)檢測(cè)等）。 11. 棄去固定液，DPBS洗2次，加入油紅O染液（工作液）1ml/孔染色15分鐘。該步驟適用 于鑒定成脂能力，若出現(xiàn)脂滴（脂肪細(xì)胞）則會(huì)呈現(xiàn)紅色著色。染色時(shí)間需實(shí)際情況確 定。 12. 棄去油紅O染液（工作液），DPBS洗3次，添加新鮮DPBS。 13. 顯微鏡下觀察并拍照。 14. 結(jié)果判定：按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見(jiàn)大面積紅色著色點(diǎn)，20倍和40倍鏡下 可觀察到紅色球形在細(xì)胞內(nèi)的情況，此紅色著色球?yàn)橹?，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)所用的MSC具有成 脂能力。否則，所使用的MSC無(wú)成脂能力。 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞易脫壁，換液時(shí)完全培養(yǎng)基必須經(jīng)室溫復(fù)溫 30 分鐘。添加培養(yǎng)基時(shí)動(dòng)作 要輕柔，沿培養(yǎng)器皿側(cè)壁緩緩加入，避免吹起細(xì)胞。 2. 細(xì)胞起始誘導(dǎo)時(shí)，融合度對(duì)誘導(dǎo)效果十分關(guān)鍵，必須確保細(xì)胞生長(zhǎng)至足夠密時(shí)再進(jìn)行誘 導(dǎo)。 3. 換液時(shí)誘導(dǎo)液必須經(jīng)過(guò)復(fù)溫，否則影響誘導(dǎo)效果和可能導(dǎo)致細(xì)胞脫壁。 4. 染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。 5. 染色過(guò)程中一定要避免組織細(xì)胞被風(fēng)干，風(fēng)干會(huì)影響顯微觀察效果。 6. 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應(yīng)立即停止使用。 7. 應(yīng)嚴(yán)格按照貯存要求貯存，避免反復(fù)凍融。 8. 操作過(guò)程應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，必須保證操作過(guò)程中使用的所有容器及所有直接接觸細(xì) 胞液的器具嚴(yán)格無(wú)菌。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）具有多向分化的潛能，在一定條件下可以體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、 成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞，是 MSC 鑒定的必檢項(xiàng)目，在多種組織來(lái)源和制作方法的 MSC 藥品 質(zhì)量控制中，成骨、成脂、成軟骨也是必檢指標(biāo)。BDBIO 成脂誘導(dǎo)分化染色試劑盒可用于鑒 定人 MSC 是否具有成脂分化能力，滿足 MSC 質(zhì)量控制的要求，此外培養(yǎng)基還可用于研究誘 導(dǎo)分化過(guò)程中的其他檢測(cè)，如 mRNA 檢測(cè)、lncRNA 檢測(cè)、microRNA 檢測(cè)、蛋白表達(dá)檢測(cè)、 油脂定量檢測(cè)、免疫組化檢測(cè)等。本產(chǎn)品誘導(dǎo) MSC 分化為的脂肪細(xì)胞多為多泡脂肪細(xì)胞樣， 當(dāng)脂肪滴融合過(guò)大時(shí)容易脫壁，難見(jiàn)單泡脂肪細(xì)胞樣，用于脂肪研究可斟酌使用本產(chǎn)品。
400-0592-051
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