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產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 一、試劑配制 1. 培養(yǎng)瓶包被液：18ml PBS加入本試劑盒1支試劑Ⅰ、1支試劑Ⅱ。 2. 增殖培養(yǎng)基：每1000ml免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中加入本試劑盒1支試劑Ⅴ。 3. 活化培養(yǎng)基的配制：配制完增殖培養(yǎng)基后，取出500ml增殖培養(yǎng)基，加入本試劑盒1支試 劑Ⅳ、1支活化培養(yǎng)基添加物。 二、取材 取材時(shí)使用一次性負(fù)壓采血管抽取自體外周血 50ml。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑） 或臨床獲得健康新生兒臍帶血。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑）。 三、NK細(xì)胞的培養(yǎng)（2L體系） 1. 培養(yǎng)前：T175培養(yǎng)瓶中加入包被液，2-8℃冰箱過夜，或置于37℃培養(yǎng)箱中至少包被2h。 2. 第0天：取出2支高效離心管，分別加入15ml樣本密度分離液，200g離心1min，確保離 心后隔片下充滿分離液，隔片上有0.5-1cm高度分離液。小心將25ml抗凝血緩慢沿管壁 加至分離液界面上，確保血液及分離液之間有明顯界面（每管可加15-25ml血液，若超過 25ml，則分管）。600g，離心30min（也可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)節(jié)），注意慢升慢降。 3. 離心后可觀察從上至下分為4層，淡黃色血漿層，白色環(huán)狀PBMC層，分離液層，紅細(xì)胞 層。用吸管吸取血漿層，做滅活處理。 滅活步驟：置于水浴鍋中56℃，30min；然后-20℃靜置10min；最后800g，離心 15min，保留上清棄去沉淀，短期保存于4℃?zhèn)溆茫L期保存請(qǐng)置于-20℃~-80℃環(huán)境下。 4. 用吸管吸取PBMC細(xì)胞層至50ml離心管中，為盡量獲得更多細(xì)胞，建議隔片以上部分全 部吸取，注意不要吸到紅細(xì)胞。在PBMC離心管中加入PBS混勻（PBS量要多于吸取的 PBMC體積），600g，離心10min。棄去上清，加入PBS復(fù)溶洗滌，300g，離心10min。 分離出的PBMC用未加任何因子的免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基配制成細(xì)胞懸液40ml，加入1整 套試劑Ⅲ（5支全部加入），加入1支試劑Ⅸ。將上述所有液體加入到棄掉包被液的培養(yǎng) 瓶中，加入8ml自體血漿，置于飽和濕度、37℃、5.0% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 （注：建議接種密度為 1-3×106 個(gè)/ml，如分離后細(xì)胞數(shù)少，則相對(duì)應(yīng)減少培養(yǎng)基及血 漿使用量，但是活化因子添加量不變。） 注意：先使用完所有活化培養(yǎng)基，再使用增殖培養(yǎng)基。由于個(gè)體差異問題，每個(gè)樣本生 長速度不一致，添加培養(yǎng)基的時(shí)間不一定要嚴(yán)格按照以下時(shí)間進(jìn)行，需根據(jù)具體情況具 體分析， 確保細(xì)胞已經(jīng)活化成功，呈現(xiàn)聚團(tuán)生長的情況，細(xì)胞數(shù)量有增殖。在補(bǔ)加培養(yǎng) 基后，細(xì)胞密度維持在 1×106 個(gè)/ml，有利于細(xì)胞的生長。 5. 第 3 天加入 40ml NK 活化培養(yǎng)基，加入 5ml 血漿，加入 1 支試劑Ⅸ，1 支試劑Ⅵ。 6. 第5天加入70ml NK活化培養(yǎng)基，加入5ml血漿，加入1支試劑Ⅸ，1支試劑Ⅶ。 7. 第7天將培養(yǎng)瓶中細(xì)胞完全吹打下來，輕輕搖勻瓶內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細(xì)胞液 計(jì)數(shù)，視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞密度，建議加入剩余自體血漿并補(bǔ)加剩余的活化培養(yǎng)基。 轉(zhuǎn)移到1個(gè)培養(yǎng)袋。 8. 第9天：輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細(xì)胞液計(jì)數(shù)，視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞 密度，建議培養(yǎng)袋補(bǔ)加增殖培養(yǎng)基500ml。 9. 第12天輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml- 1ml細(xì)胞液計(jì)數(shù)，視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞 密度，建議培養(yǎng)袋補(bǔ)加增殖培養(yǎng)基1000ml 。此時(shí)取樣做細(xì)菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素 檢測。 注：如需繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)體系至4L，請(qǐng)購買本公司免疫細(xì)胞培養(yǎng)基1L * 2 瓶、2支Ⅴ號(hào)因 子、1個(gè) 2.5L體系懸浮細(xì)胞培養(yǎng)袋。 四、擴(kuò)增步驟 1. 第13-15天視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞密度選擇適當(dāng)擴(kuò)增時(shí)間，輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取 出0.5ml- 1ml細(xì)胞液計(jì)數(shù)，無菌條件下取出袋內(nèi)一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)至一個(gè)新的培養(yǎng)袋內(nèi)。 配制增殖培養(yǎng)基：每1L免疫細(xì)胞培養(yǎng)基 加入1支Ⅴ號(hào)因子； 建議向兩個(gè)培養(yǎng)袋內(nèi)各補(bǔ)加 1000ml 增殖培養(yǎng)基。 2. 第15天收集NK細(xì)胞懸液2000ml，1500rpm×5min離心后棄去上清液，250ml離心管集 2管每管生理鹽水200ml洗滌（1500rpm×8min）1次，再用50ml離心管生理鹽水100ml 洗滌（1200rpm×5min）1次，按照100ml生理鹽水+8ml 20%人血清白蛋白重懸細(xì)胞， 封裝好后送病房，同時(shí)留樣封存以備日后檢測。 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，并嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行操作。 2. 本試劑盒必須按規(guī)定溫度保存，不可反復(fù)凍融。試劑在使用前需解凍，并充分混勻，不 可劇烈震蕩。 3. 可視細(xì)胞生長的實(shí)際狀況適當(dāng)調(diào)整補(bǔ)液時(shí)間和用量。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 根據(jù)說明書內(nèi)容，有效期12個(gè)月。 |
產(chǎn)品詳情
超級(jí) NK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)試劑套裝（2L）是一款專為 NK 細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的無血清、無異源 動(dòng)物成分的擴(kuò)增培養(yǎng)試劑盒，產(chǎn)品性能高，質(zhì)量穩(wěn)定，適用血液類型范圍廣。超級(jí) NK 細(xì)胞 培養(yǎng)方案將血液中內(nèi)源性的 CD34+細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為 NK 細(xì)胞，且可抑制 T 細(xì)胞的增殖，因 此本款細(xì)胞因子試劑盒培養(yǎng)后 NK 純度（CD3-CD16+CD56+）更高，新鮮臍帶血、外周血 來源培養(yǎng)后 NK 純度穩(wěn)定在 95%以上，凍存細(xì)胞培養(yǎng)后 NK 純度穩(wěn)定在 85%以上。
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