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產(chǎn)品概述
| 來源 | 顱頂骨 |
|---|---|
| 形態(tài) | 貼壁、成纖維樣 |
| 培養(yǎng) | a-MEM培養(yǎng)基+10%FBS 37℃ 5%CO2 |
| 傳代 | 0.25%胰蛋白酶消化2-3min，比例1:2-1:4 |
| 產(chǎn)品簡介 | MC3T3-E1細(xì)胞在含有抗壞血酸的培養(yǎng)基中生長后，選擇亞克隆用于高或低成骨細(xì)胞分化和礦化，獲得了MC3T3-E1 Subclone 4、MC3T3-E1 Subclone 14、MC3T3-E1 Subclone 24、MC3T3-E1 Subclone 30等多個亞系。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗壞血酸和3-4mM無機磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化，10天后形成一個礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化，不形成ECM，可以作為MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的陰性對照。礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨鈣素(OCN)和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1（成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子）。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細(xì)胞只是產(chǎn)生纖維組織。這些細(xì)胞系是研究體外成骨細(xì)胞分化的好模型，尤其是ECM信號，它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細(xì)胞的行為類似。 |
| 收貨指南 | |
| 培養(yǎng)方法 | 對于懸浮細(xì)胞： 1. 若離心對細(xì)胞影響不大，可將細(xì)胞懸浮液收集在試管中； 2. 150x g離心5分鐘，棄上清； 3. 加入新鮮培養(yǎng)液，按1∶2或1∶3的比例分裝到2或3個培養(yǎng)瓶中（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）； 或： 1. 若離心對細(xì)胞影響大，培養(yǎng)瓶直立靜置半小時左右，待大部分細(xì)胞都沉降到細(xì)胞瓶底，吸出1/2~2/3的舊培養(yǎng)基； 2. 加入新鮮培養(yǎng)液，按1∶2或1∶3的比例分裝到2或3個培養(yǎng)瓶中（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定），再逐瓶加入新鮮培養(yǎng)基。 對于貼壁細(xì)胞： 1. 盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基； 2. 加3-4mL 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS； 3. T25瓶加1mL左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層； 4. 將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化； 5. 消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3mL完全培養(yǎng)基終止胰酶消化； 6. 混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清； 7. 加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 8. 補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。 |
| 生物安全等級 | 1請在無菌環(huán)境中操作，避免污染；為了保護細(xì)胞的穩(wěn)定性，細(xì)胞傳代次數(shù)不宜過多；為了結(jié)果的可靠性，實驗前請確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好；嚴(yán)格遵守生物安全操作規(guī)程。 |
| 免責(zé)聲明 | 本產(chǎn)品僅用于科研目的，不得用于臨床診斷、治療等用途。用戶應(yīng)遵循國家和地區(qū)的法律法規(guī)，自行承擔(dān)使用本產(chǎn)品所產(chǎn)生的一切風(fēng)險和責(zé)任。請在使用前仔細(xì)閱讀本說明書，并按照指導(dǎo)操作。如有任何疑問或需要進一步信息，請與我們聯(lián)系。 |
產(chǎn)品詳情
