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產(chǎn)品概述
| 來源 | 皮下結(jié)締組織 |
|---|---|
| 形態(tài) | 貼壁、成纖維樣 |
| 培養(yǎng) | DMEM+10%FBS+其他生長添加劑37℃ 5%CO2 |
| 傳代 | 0.25%胰蛋白酶消化1-2min，比例1:3-1:4 |
| 產(chǎn)品簡介 | 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞（Mouse subcutaneous connective tissue cells）LWnt-3A是由L-M(TK-) 細(xì)胞通過轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt-3A表達(dá)載體并在含G418的培養(yǎng)基中篩選得到的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。L Wnt-3A細(xì)胞可以分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白，主要應(yīng)用于與Wnt-3A信號相關(guān)的分子機制研究中。 |
| 收貨指南 | 1. T25細(xì)胞瓶到貨后處理方案： （1） 驗貨：培養(yǎng)瓶上標(biāo)簽、培養(yǎng)瓶完好性以及瓶口是否有漏液； （2） 處置：75%酒精對培養(yǎng)瓶消毒后，放入37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2-4小時后，進(jìn)行顯微觀察、拍照，作為售后維權(quán)依據(jù)； （3）注意：貼壁細(xì)胞在運輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象，靜置后可恢復(fù)貼壁。 2. 凍存管到貨后處理方案： （1） 驗貨：包裝的標(biāo)簽、包裝內(nèi)是否有干冰、凍存管完好性； （2） 處置：盡快復(fù)蘇（見培養(yǎng)方法）或程序降溫后轉(zhuǎn)移至液氮中保存。 |
| 培養(yǎng)方法 | 1.培養(yǎng)基： 89% DMEM培養(yǎng)基；10% 胎牛血清（FBS）；1%青霉素-鏈霉素（P/S）；其他生長添加劑。 2. 復(fù)蘇： （1）解凍：用鑷子將凍存管浸于37 ℃水浴；反復(fù)搖晃，迅速完成解凍； （2）離心：噴灑75%酒精消毒后，在無菌環(huán)境下，打開凍存瓶，用移液器將細(xì)胞連同凍存液移至含1 mL完全培養(yǎng)基的10 mL離心管中，室溫1200 rpm離心3-5 min，細(xì)胞沉于離心管底部； （3）培養(yǎng)：將上清液輕輕棄去，加2 mL完全培養(yǎng)基，輕柔懸起細(xì)胞，然后將所有細(xì)胞懸液移至含有3 mL完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶中，于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； （4）觀察：每日觀察細(xì)胞生長狀態(tài)（培養(yǎng)基顏色、細(xì)胞貼壁情況、形態(tài)與密度等）并拍照。 3. 傳代： 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%開始傳代 懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞懸液，1200 rpm離心3-5 min，無菌下棄上清液，加1mL完全培養(yǎng)基懸起細(xì)胞。 貼壁細(xì)胞： （1）清洗：無菌下吸出培養(yǎng)基，用37 ℃預(yù)熱的PBS清洗一次； （2）消化：加1 mL 0.25%胰蛋白酶消化液，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶令其浸潤所有細(xì)胞，室溫（或37 ℃）消化，顯微鏡下觀察到細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回超凈臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1 mL完全培養(yǎng)基終止消化； （3）離心：用移液器輕柔吹勻后然后將懸液轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，在1200 rpm離心3-5 min； （4）培養(yǎng)：無菌下棄上清液，加1 mL完全培養(yǎng)基懸起細(xì)胞并移至T25培養(yǎng)瓶中；按1:3-1:4比例添加完全培養(yǎng)基，用移液器輕柔吹勻后，分裝至培養(yǎng)瓶中，于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
| 生物安全等級 | 1請在無菌環(huán)境中操作，避免污染；為了保護(hù)細(xì)胞的穩(wěn)定性，細(xì)胞傳代次數(shù)不宜過多；為了結(jié)果的可靠性，實驗前請確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好；嚴(yán)格遵守生物安全操作規(guī)程。 |
| 免責(zé)聲明 | 本產(chǎn)品僅用于科研目的，不得用于臨床診斷、治療等用途。用戶應(yīng)遵循國家和地區(qū)的法律法規(guī)，自行承擔(dān)使用本產(chǎn)品所產(chǎn)生的一切風(fēng)險和責(zé)任。請在使用前仔細(xì)閱讀本說明書，并按照指導(dǎo)操作。如有任何疑問或需要進(jìn)一步信息，請與我們聯(lián)系。 |
產(chǎn)品詳情
