產品簡介

貨號：RP1200
規格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反復凍融，復檢期為 1 年。
產品內容：
試劑盒組成 50 次 100 次
AMV(10U/ul) 25ul 50ul
5×AMV Buffer(含 DTT) 250ul 500ul
Oligo(dT)16(10uM) 250ul 500ul
RNasin(40U/ul) 25ul 50ul
dNTPs(10mM) 200ul 400ul
Taq Polymerase(5U/ul) 25ul 50ul
10×PCR Buffer 250ul 500ul
RNase-free ddH2O 1ml 2ml
說明書 1 份 1 份
產品簡介：
本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉錄反應以及隨后的 PCR 擴增。它采用 AMV 進行反轉錄反應，能夠獲得更長的反轉錄產物。同時，在 25ul 反轉錄體系和 50ul PCR 反應體系中，還可以一次性得到足夠量的 PCR 產物用于后續的克隆實驗。
本試劑盒中配置的酶均為進口的酶。RT 酶采用進口的 AMV，所以 cDNA 更長，基因的信息保留得更完整！反轉錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分
子生物學實驗。
操作步驟：
一、反轉錄反應
1、在冰浴的無菌無 RNase 的離心管中加入如下反應成分：
0.5ug RNA 模板
5ul Oligo(dT)16引物
補 RNase-free ddH2O 至 11.5ul
2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 5min，簡短離心收集反應液后加入以下各組分：
5ul 5×AMV Buffer
2.5ul dNTPs
0.5ul RNasin
0.5ul AMV
補 RNase-free ddH2O 至 25ul
3、42℃溫浴 60min，如果是用隨機引物，請將離心管置 37℃溫浴 60min。
4、反應后將離心管置冰上，反應產物可用于進行后續實驗或-20℃保存。
二、PCR 反應
1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應體系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用戶自備 10um） 1ul
下游引物（用戶自備 10um） 1ul
RT 反應產物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。
注意事項：
1、用于 cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用 DEPC 進行處理，并在高壓滅菌后使用。
有些試劑不能高壓滅菌時，首先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除
菌處理。
2、RNA 樣品要避免反復多次凍融，應使 RNA 在冰浴中處于融化狀態。
3、如果 PCR 效果不理想，可以適當優化條件，比如改變退火溫度或增加模板量。