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產品簡介
本試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸
酶抑制劑，作用較為強烈，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗，由于含有上
述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。
操作方法：
1、組織總蛋白的提取
1) 在 1ml 的冷裂解液中各加入 10ul 的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和 PMSF；混勻，放置在冰上
備用；
2) 稱取 0.1g 的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然
后加入 0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作；
3) 將組織勻漿液移入 1.5ml 的 EP 管中，4 ℃ 12000g 離心 30min；
4) 吸取上清至新的管中；
5) 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。）
2、細胞總蛋白的提取
1) 裂解液的用量：107 個細胞需要裂解液 1ml；
2) 貼壁細胞：棄去培養基，用冷的 PBS 洗兩次，棄去 PBS，然后加入計算好的細胞裂解液；在冰
上用細胞刮刀進行刮離細胞，將刮離的細胞裂解液移入 EP 管中，顛倒裂解 20-30min。
3) 懸浮細胞：4℃ 400g 離心收集細胞，用冷的 PBS 洗兩次細胞，同樣按細胞數加入裂解液，渦旋
10s，放置冰上裂解 10min，重復 3-4 次；
4) 裂解完畢之后，將細胞裂解液 4 ℃12000g 離心 30min；
5) 將上清移入新的 EP 管中；進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。）
注意事項：
1. 實驗過程，所有試劑都要需要預冷或者即融，保證操作過程中的低溫環境。
2. PSMF（有毒）現用現加，因為 PMSF 在水溶液中會快速降解。
