產品簡介：

線粒體通透性轉換孔檢測試劑盒（Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit）是一種采用膜通透性的熒光探針Calcein AM檢測線粒體通透性轉換孔開放程度的試劑盒。相比于基于線粒體膜電位的方法更直接地檢測到線粒體通透性轉換孔開放程度的變化。由于Calcein AM的毒性特別低，并且不會抑制細胞的增殖、趨化性等絕大部分功能，所以與其它同類產品如CFDA SE等相比是更適合染活細胞的熒光探針。

本試劑盒的檢測原理如下，Calcein AM是一種可以對活細胞進行熒光染色的非極性染料，可通過被動運輸進入細胞內并在細胞質組分包括線粒體等中積累。在細胞中，幾乎沒有熒光的Calcein AM被細胞內的酯酶水解去除乙酰甲酯，生成沒有膜通透性的極性熒光染料鈣黃綠素（Calcein or Fluorexon），從而使Calcein滯留在細胞內，并使細胞質包括線粒體等呈現強綠色熒光。Calcein本身是一種金屬絡合指示劑，在生理pH條件下和Co²⁺、Ni²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺和Mn²⁺等金屬離子絡合時，熒光信號會發生淬滅。本試劑盒提供了CoCl₂用于淬滅細胞質中Calcein的綠色熒光，但由于正常情況下線粒體的MPTP是關閉的，此時CoCl₂不能進入線粒體，所以Calcein AM染色后經CoCl2處理會導致僅線粒體內呈現Calcein的綠色熒光。作為對照，可將細胞用Calcein AM染色并經過CoCl2處理之后，用鈣離子載體Ionomycin進一步處理以誘導細胞外的Ca²⁺大量進入細胞內和線粒體基質并導致MPTP的開放，或者用適當的條件刺激細胞導致MPTP少量或大量開放，從而使部分Calcein釋放進入細胞漿和鈷離子結合而失去熒光，同時細胞漿中的鈷離子能進入線粒體內而導致其中的Calcein的綠色熒光部分甚至全部淬滅，最終導致線粒體中Calcein綠色熒光減弱或消失。這樣根據線粒體中Calcein綠色熒光的強弱來判斷線粒體MPTP開放的程度，綠色熒光越強，開放程度越低，綠色熒光越弱，開放程度越高。

如果用于流式細胞儀，每個樣品的檢測體系體積為1ml時，可以進行100次檢測；96孔板每孔檢測體系的體積為100μl時可以檢測1000次。

產品組份：

使用方法（僅供參考）：（詳細見說明書）

注意事項：

1．熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2．Calcein AM (1000X)須盡量避免反復凍融。如果多次使用，請注意適當分裝。

3．CoCl₂有腐蝕性，對人體有害或有刺激性，對人體有呼吸道、生殖等特定器官毒性，或致畸致癌毒性，操作時請小心，并確保有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內，并須注意避免腐蝕其它物品。

4．CoCl₂對水生生物有毒或有害，禁止直接排入環境。

5．本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

6．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20oC保存，一年有效。Calcein AM (1000X)和Ionomycin (200X)需要避光保存。