真菌毒素：又稱(chēng)霉菌毒素，是一類(lèi)無(wú)色、 無(wú)嗅、無(wú)味的化合物。霉菌毒素是霉菌在其所污染的食品中產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。

真菌毒素廣泛污染農(nóng)作物、 食品及飼料等植物源產(chǎn)品。不僅能導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品霉敗變質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失，品質(zhì)降低，更嚴(yán)重的危害是被污染的糧食和飼料將誘發(fā)動(dòng)物以及人 類(lèi)腫瘤發(fā)生。
在我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品及飼料中常見(jiàn)的、危害較大的真菌毒素有黃曲霉毒素、嘔吐毒素（脫氧雪腐鋪刀菌烯醇 ）、玉米赤霉烯酮／ZEN、伏馬菌素、 豬曲霉毒素A等，這些毒素對(duì)農(nóng)產(chǎn)品及飼料的污染在2002 年被世界衛(wèi)生組織列為食源性疾病的重要根源。我國(guó)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)食品(GB27 61- 2017) 和飼料 (GB 13078-2017) 中的真菌毒素限量檢測(cè)都做出了明確的規(guī)定，另外2020 版藥典也提出了6類(lèi)真菌毒素在中藥檢測(cè)中的要求。隨著社會(huì)對(duì)食品安全重視越來(lái)越強(qiáng)，真菌毒素檢測(cè)需求持續(xù)增加。

真菌毒素免疫親和柱

凈化機(jī)理

免疫親和柱利用抗原抗體特異性可逆結(jié)合的原理，將毒素杭體與凝膠共價(jià)結(jié)合，然后填充柱子。將樣品提取溶液過(guò) 免疫親和柱，與抗體分子有特異性結(jié)合的黃曲霉毒素被固定，而非目標(biāo)化合物則沿柱流出，再用甲醇將黃曲霉毒素洗脫，根據(jù)待測(cè)物分子熒光特性， 用高效液相色譜或?qū)Ｓ枚繜晒馑贉y(cè)儀進(jìn)行定量檢測(cè)。

????黃曲霉毒素??????????????赫曲毒素????????????玉米赤霉烯酮?????????嘔吐毒素
????Aflatoxin B1????????????Ochratoxin A???????????Zear alenone???????Deoxynivalenol

真菌毒素免疫親和柱免疫親和柱凈化過(guò)程（黃曲霉毒素Bl為例）

一

樣品制備


參考《GB 5009.22-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉鑿素B族和G族的測(cè)定》。

1, 均質(zhì)
準(zhǔn)確稱(chēng)取20.0g粉碎的樣品，加入100ml 70％甲醇 水（體積比）混勻，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min;
2, 提取
提取液用玻璃纖維濾紙過(guò)濾或5000r/min離心Smin，取10ml濾液加入20ml水稀釋?zhuān)靹颍?br style="margin: 0px; padding: 0px;"/>3, 過(guò)濾
用快速定性濾紙或玻璃微纖維濾紙或定量濾紙過(guò)濾，收集濾液，取15ml

注意：對(duì)千樣品提取液(pH<6或pH>8)的樣品， 需調(diào)節(jié)pH至中性， 并用玻璃微纖維濾紙／定量濾紙過(guò)濾； 對(duì)千渾濁難過(guò)濾的樣品， 可用離心機(jī)離心使其分層



二, 樣品凈化


注意：整個(gè)純化過(guò)程盡量不要讓柱子液體流干！

（1）取出免疫親和層析微柱，將上方塞子取出剪斷， 再插回親和柱上
（2）將柱子與泵流操作架上的玻璃針筒連接固定，去掉親和柱下方堵頭，用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌1次，流速1.5ml/min;
（3）將處理后的溶液上樣， 使 液體以1.5 ml/min的速度流出；
（4）用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌2次，流速1.5ml/min, 直至2~3mL空氣通過(guò)柱體，保證柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體
（5）用1ml甲醇洗脫，用樣品瓶／玻璃試管接洗脫液， 流速1ml/min;
（6）脫后液體可用于檢測(cè)。

一，注意事項(xiàng)


（1）黃曲霉毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5％次氯酸鈉浸泡過(guò)夜。
（2）不要使用過(guò)有效期的免疫親和柱。
（3）免疫親和柱應(yīng)在2~8它保存，不要冷凍。
（4） 使用前，免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右）。
（5）樣本AFB1含量高千柱容量時(shí)，需適當(dāng)降低上樣體積。
（6）必須保證過(guò)柱的樣品提取液pH在6~8之間，可用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整。
（7）稱(chēng)取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議最低不少于1