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| ■ 制品內(nèi)容(Code No. 3281) |
| Cell Lysate＊1100 μlMixture-1 60 μlMixture-2＊210 μlMixture-3＊220 μlT7 RNA Polymerase (200 U/μl) 10 μlpT7-IRES Vector (0.5 μg/μl)20 μlControl Vector＊3 (0.3 μg/μl)5 μl |
| *1 現(xiàn)用現(xiàn)融解，使用微量移液器輕輕混合均勻并迅速使用，使用完畢立即置于-80℃保存。 注：雖然5次反復(fù)凍融基本不會造成產(chǎn)品性能下降，但建議小量分裝保存。 *2 Mixture-2和Mixture-3中均含有蛋白質(zhì)，其中Mixture-2中含有HN標(biāo)簽蛋白質(zhì)，因此應(yīng)避免劇烈攪拌或振蕩。 *3 該質(zhì)粒在pT7-IRES中插入了β-半乳糖苷酶基因。 |
| ■ 制品說明 |
| Human Cell-Free Protein Expression System是利用人源細(xì)胞提取物的無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)。本系統(tǒng)中的Cell Lysate包含了所有體外蛋白質(zhì)合成的必需因子(核糖體、翻譯起始/延伸因子和tRNA等)。只需將攜帶靶基因的pT7-IRES Vector、T7 RNA Polymerase、Mixture-3(氨基酸和ATP等)和Mixture-2(翻譯增強因子)加入到Cell Lysate中，就可以在一個反應(yīng)管中完成從RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白質(zhì)合成的反應(yīng)，操作十分簡單。本制品具有反應(yīng)體系小、反應(yīng)速度快、可合成無細(xì)胞蛋白質(zhì)的優(yōu)點。 pT7-IRES Vector轉(zhuǎn)錄得到的目的RNA含有IRES序列，這段序列能夠增強蛋白質(zhì)翻譯的起始。反應(yīng)液中添加了翻譯增強因子，在蛋白質(zhì)合成過程中，它能夠活化Cell Lysate中無活性的翻譯起始因子，從而維持了穩(wěn)定的翻譯水平。本系統(tǒng)不僅提高了蛋白質(zhì)合成的效率，彌補了哺乳類無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)翻譯水平低的缺陷，而且能夠合成超過150 kDa的高分子量蛋白質(zhì)。 本系統(tǒng)適用于高通量的蛋白質(zhì)合成反應(yīng)，只需一步即可完成。由于毒性蛋白會抑制宿主細(xì)胞生長和功能，導(dǎo)致很難利用活細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來合成毒性蛋白質(zhì)，所以本系統(tǒng)尤其適用于合成毒性蛋白質(zhì)。 * 3290/3291/3292與3281搭配使用，可表達(dá)帶有His標(biāo)簽或Myc標(biāo)簽的蛋白質(zhì)。 ■ 保存3281：-80℃；3290、3291、3292：-20℃。 |
| ■ pT7-IRES Vector 的結(jié)構(gòu) |
 |
| HumanCell-FreeProteinExpressionSystem | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | 3281 | HumanCell-FreeProteinExpressionSystem | 10次 |
| Takara | 3290 | pT7-IRESHis-NDNA | 20μg |
| Takara | 3291 | pT7-IRESHis-CDNA | 20μg |
| Takara | 3292 | pT7-IRESMyc-NDNA | 20μg |
