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| ■ 制品內(nèi)容 | |
| SPP System Set (Code No.: 3366) | |
| 1. SPP System Set pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA | 各20 μg |
| 2. pMazF DNA (20 ng/μl) | 0.5 μg |
| 3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) | 0.2 μg |
| SPP System I～IV (Code No.: 3367～3370) | |
| 1. pCold I～IV (SP-4) DNA中一個(gè)(0.5 μg/μl) | 20 μg |
| 2. pMazF DNA (20 ng/μl) | 0.5 μg |
| 3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) | 0.2 μg |
| ■ GenBank登錄 | |
| Accession No. pCold I (SP-4) DNAAB248600 pCold II (SP-4) DNAAB248601 pCold III (SP-4) DNAAB248602 pCold IV (SP-4) DNAAB248603 ■ 鏈長(zhǎng) pCold I (SP-4) DNA4,407 bp pCold II (SP-4) DNA4,392 bp pCold III (SP-4) DNA4,377 bp pCold IV (SP-4) DNA4,359 bp | |
| ■ 制品說(shuō)明 | |
| 根據(jù)美國(guó)新澤西州醫(yī)學(xué)與牙科大學(xué)的井上正順博士小組的研究，大腸桿菌的蛋白質(zhì)MazF是一種能夠識(shí)別并切斷單鏈RNA特定序列 (ACA) 的核酸內(nèi)切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白質(zhì)表達(dá)，只表達(dá)目的蛋白質(zhì)。利用這一技術(shù)，開(kāi)發(fā)了Single Protein Production (SPP) System。在SPP System中，在保持氨基酸序列不變的情況下用非ACA序列置換目的基因中的ACA序列，然后與MazF基因共表達(dá)。大部分宿主蛋白的mRNA因?yàn)橛蠥CA序列而被MazF分解，表達(dá)被抑制，但是目的基因的轉(zhuǎn)錄mRNA中不含有ACA序列，不能被MazF切斷，從而使目的蛋白得到高效表達(dá)。由于目的蛋白質(zhì)的不同，也有比單純使用冷休克表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)時(shí)表達(dá)量低的情況。構(gòu)建SPP系統(tǒng)，首先需要通過(guò)化學(xué)合成或點(diǎn)突變的方法制備無(wú)ACA序列的目的基因。設(shè)計(jì)無(wú)ACA基因的時(shí)候，在確保氨基酸序列不變的情況下將ACA序列替換，同時(shí)加入必須的酶切位點(diǎn)。其次，將無(wú)ACA基因克隆至含有無(wú)ACA轉(zhuǎn)錄區(qū)域的pCold (SP-4) 載體中。至此，用于目的片段的SPP系統(tǒng)表達(dá)的載體準(zhǔn)備完畢，將其與能夠表達(dá)足量的MazF的pMazF載體共轉(zhuǎn)化至E.coli中，形成了目的片段的SPP。SPP System用的冷休克表達(dá)載體與pCold冷休克表達(dá)載體一樣，根據(jù)TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位點(diǎn)序列有無(wú)，分成4個(gè)載體，分別是pCold I～I(xiàn)V (SP-4) DNA，pCold IV (SP-4)在多克隆位點(diǎn)的上游沒(méi)有附加的序列。 ■ 保存-20℃。 ■ 特長(zhǎng)同位素標(biāo)記方便：標(biāo)記的目的蛋白質(zhì)最大可達(dá)到宿主胞內(nèi)新生蛋白質(zhì)的90%。使用宿主廣泛：CspA啟動(dòng)子來(lái)源于大腸桿菌，所以大部分的大腸桿菌都可作為宿主使用。因?yàn)楣脖磉_(dá)用載體pMazF DNA的篩選標(biāo)記是氯霉素，所以具有氯霉素抗性的大腸桿菌 (例如：Rosseta等)不能作為宿主使用。 ■ 純度用于pCold (SP-4) DNA系列載體。1. 用雙脫氧測(cè)序法確認(rèn)多克隆位點(diǎn)。2. 確認(rèn)多克隆位點(diǎn)上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一個(gè)酶切位點(diǎn)。 | |
| ■ SPP System 原理圖 | |
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| ■ SPP System冷休克表達(dá)載體圖譜 | |
| TEE序列His tag序列Factor Xa切斷序列pCold I (SP-4) DNA○○○pCold Ⅱ (SP-4) DNA○○×pCold Ⅲ (SP-4) DNA○××pCold Ⅳ (SP-4) DNA××× | |
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| ■ MazF表達(dá)質(zhì)粒pMazF DNA載體圖譜 | |
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| SPPSystem?Set | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | 3366 | SPPSystem?Set | 1Set |
| Takara | 3367 | SPPSystem?I | 1Set |
| Takara | 3368 | SPPSystem?II | 1Set |
| Takara | 3369 | SPPSystem?III | 1Set |
| Takara | 3370 | SPPSystem?IV | 1Set |
400-0592-051
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