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| ■ 制品內容 | |
| SPP System Set (Code No.: 3366) | |
| 1. SPP System Set pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA | 各20 μg |
| 2. pMazF DNA (20 ng/μl) | 0.5 μg |
| 3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) | 0.2 μg |
| SPP System I～IV (Code No.: 3367～3370) | |
| 1. pCold I～IV (SP-4) DNA中一個(0.5 μg/μl) | 20 μg |
| 2. pMazF DNA (20 ng/μl) | 0.5 μg |
| 3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) | 0.2 μg |
| ■ GenBank登錄 | |
| Accession No. pCold I (SP-4) DNAAB248600 pCold II (SP-4) DNAAB248601 pCold III (SP-4) DNAAB248602 pCold IV (SP-4) DNAAB248603 ■ 鏈長 pCold I (SP-4) DNA4,407 bp pCold II (SP-4) DNA4,392 bp pCold III (SP-4) DNA4,377 bp pCold IV (SP-4) DNA4,359 bp | |
| ■ 制品說明 | |
| 根據美國新澤西州醫學與牙科大學的井上正順博士小組的研究，大腸桿菌的蛋白質MazF是一種能夠識別并切斷單鏈RNA特定序列 (ACA) 的核酸內切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白質表達，只表達目的蛋白質。利用這一技術，開發了Single Protein Production (SPP) System。在SPP System中，在保持氨基酸序列不變的情況下用非ACA序列置換目的基因中的ACA序列，然后與MazF基因共表達。大部分宿主蛋白的mRNA因為有ACA序列而被MazF分解，表達被抑制，但是目的基因的轉錄mRNA中不含有ACA序列，不能被MazF切斷，從而使目的蛋白得到高效表達。由于目的蛋白質的不同，也有比單純使用冷休克表達載體進行表達時表達量低的情況。構建SPP系統，首先需要通過化學合成或點突變的方法制備無ACA序列的目的基因。設計無ACA基因的時候，在確保氨基酸序列不變的情況下將ACA序列替換，同時加入必須的酶切位點。其次，將無ACA基因克隆至含有無ACA轉錄區域的pCold (SP-4) 載體中。至此，用于目的片段的SPP系統表達的載體準備完畢，將其與能夠表達足量的MazF的pMazF載體共轉化至E.coli中，形成了目的片段的SPP。SPP System用的冷休克表達載體與pCold冷休克表達載體一樣，根據TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位點序列有無，分成4個載體，分別是pCold I～IV (SP-4) DNA，pCold IV (SP-4)在多克隆位點的上游沒有附加的序列。 ■ 保存-20℃。 ■ 特長同位素標記方便：標記的目的蛋白質最大可達到宿主胞內新生蛋白質的90%。使用宿主廣泛：CspA啟動子來源于大腸桿菌，所以大部分的大腸桿菌都可作為宿主使用。因為共表達用載體pMazF DNA的篩選標記是氯霉素，所以具有氯霉素抗性的大腸桿菌 (例如：Rosseta等)不能作為宿主使用。 ■ 純度用于pCold (SP-4) DNA系列載體。1. 用雙脫氧測序法確認多克隆位點。2. 確認多克隆位點上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一個酶切位點。 | |
| ■ SPP System 原理圖 | |
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| ■ SPP System冷休克表達載體圖譜 | |
| TEE序列His tag序列Factor Xa切斷序列pCold I (SP-4) DNA○○○pCold Ⅱ (SP-4) DNA○○×pCold Ⅲ (SP-4) DNA○××pCold Ⅳ (SP-4) DNA××× | |
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| ■ MazF表達質粒pMazF DNA載體圖譜 | |
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| SPPSystem?Set | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | 3366 | SPPSystem?Set | 1Set |
| Takara | 3367 | SPPSystem?I | 1Set |
| Takara | 3368 | SPPSystem?II | 1Set |
| Takara | 3369 | SPPSystem?III | 1Set |
| Takara | 3370 | SPPSystem?IV | 1Set |
