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| ■ 制品說明 |
| 腺相關病毒 (AAV) 是Dependovirus屬Parvovirus家族的無包膜病毒。AAV對人無致病性，只有在輔助病毒如腺病毒或皰疹病毒存在下才能復制。AAV基因組是約4.7 kb的單鏈線狀DNA分子，在每個末端都有發夾結構的反向末端重復序列 (ITRs) ，ITRs的功能在于基因組復制起始位點及包裝病毒粒子。AAV基因組包含了3個開放閱讀框 (圖1) ：Rep編碼參與復制和轉錄的蛋白質；Cap編碼病毒衣殼蛋白質；AAP編碼用于病毒粒子形成的非結構蛋白質。Rep區域編碼4種不同的蛋白質 (Rep78, Rep68, Rep52和Rep40) ，Cap區域編碼3種不同的蛋白質 (VP1, VP2和VP3) 。 AAV有100多種血清型，不同血清型病毒間的宿主特異性和特點有所不同。Takara Bio Inc.提供AAV 1型 (AAV1) 、2型 (AAV2) 、5型 (AAV5) 、6型 (AAV6) 的制備試劑盒。2型 (AAV2) 具有廣泛的研究應用，包括基因治療，也具備泛嗜性特點。而AAV1、AAV5和AAV6卻受限于組織宿主。AAV1對于肌肉、肝臟、呼吸道和中樞神經系統有高轉導效率；AAV5對于中樞神經系統、肝臟和視網膜有高轉導效率；AAV6對于心肌細胞、肌肉和肝臟有高轉導效率。 腺相關病毒載體 (AAV載體) 能夠轉導基因進入細胞和生物體，可用作研究工具和基因治療的載體。另外，AAV載體較腺病毒載體和逆轉錄病毒載體更安全。AAV載體能用于轉導基因進入增殖和非增殖細胞，以及在未分裂細胞內的長期表達，AAV很少有免疫原性，非常適用于轉導基因進入動物體內 (作為體內轉導工具) 。 |
| ■ 制品特點 |
| 使用AAV Helper Free System制備AAV病毒 AAV Helper Free System是一種特別的可制備高滴度AAV的無輔助病毒系統 (圖2) 。6230試劑盒包含3種質粒，只需將制備AAV病毒所需的這3種載體質粒轉染于HEK293細胞中，即可制備AAV病毒。 ·pRC2-mi342 Vector：包含AAV2的Rep基因和Cap基因 *pRC2-mi342可表達hsa-miR-342，hsa-miR-342是一種病毒制備系統中可提高病毒滴度的人源miRNA。與一般 只表達Rep基因和Cap基因的pRC2 Vector相比，病毒滴度可提高2倍。 ·pHelper Vector：包含腺病毒的E2A、E4和VA基因的載體質粒。 ·pAAV-CMV Vector：包含目的基因表達啟動子和2個ITR的載體質粒。質粒包含目的基因克隆（GOI）位點，GOI 由CMV啟動子表達。由于AAV病毒中能夠包裝的插入DNA大小有限，使用試劑盒中pAAV-CMV Vector時，插入的DNA片段大小應在2.5 kb以下。 |
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| 圖2.使用AAVpro Helper Free System 制備AAV病毒 |
| ■ 制品內容 |
| AAVpro? Helper Free System (AAV1) （Code No. 6673） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl)20 μlpRC1 Vector (1 μg/μl)20 μlpHelper Vector (1 μg/μl)20 μlAAV Extraction Solution A1.5 ml×3AAV Extraction Solution B150 μl×3 Limited Use Label License: [M84] |
| AAVpro? Helper Free System (AAV2)（Code No. 6230） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl)20 μlpRC2-mi342 Vector (1 μg/μl)20 μlpHelper Vector (1 μg/μl)20 μlAAV Extraction Solution A1.5 ml×3AAV Extraction Solution B150 μl×3 Limited Use Label License: [M83], [M84] |
| AAVpro? Helper Free System (AAV5) （Code No. 6650） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl)20 μlpRC5 Vector (1 μg/μl)20 μlpHelper Vector (1 μg/μl)20 μlAAV Extraction Solution A1.5 ml×3AAV Extraction Solution B150 μl×3 Limited Use Label License: [M84] |
| AAVpro? Helper Free System (AAV6) （Code No. 6651） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl)20 μlpRC6 Vector (1 μg/μl)20 μlpHelper Vector (1 μg/μl)20 μlAAV Extraction Solution A1.5 ml×3AAV Extraction Solution B150 μl×3 Limited Use Label License: [M84] |
| AAVpro? Packaging Plasmid (AAV1) （Code No. 6672） |
| pRC1 Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2pHelper Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2 |
| AAVpro? Packaging Plasmid (AAV2) （Code No. 6234） |
| pRC2-mi342 Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2pHelper Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2 Limited Use Label License: [M83] |
| AAVpro? Packaging Plasmid (AAV5) （Code No. 6664） |
| pRC5 Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2pHelper Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2 |
| AAVpro? Packaging Plasmid (AAV6) （Code No. 6665） |
| pRC6 Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2pHelper Vector (1 μg/μl)0.5 ml×2 |
| ■ 各載體序列 |
| zip壓縮形式，點擊查看： · pAAV-LacZ（fasta data） · pHelper（fasta data） · pRC1（fasta data） · pRC5（fasta data） · pRC6（fasta data） · pRC2-mi342（fasta data） |
| ■ 保存 |
| -20℃。 AAV Extraction Solution A 和AAV Extraction Solution B融解后，請于室溫保存。 |
| AAVpro?HelperFreeSystem | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | 6673 | AAVpro?HelperFreeSystem(AAV1) | 1Kit |
| Takara | 6230 | AAVpro?HelperFreeSystem(AAV2) | 1Kit |
| Takara | 6650 | AAVpro?HelperFreeSystem(AAV5) | 1Kit |
| Takara | 6651 | AAVpro?HelperFreeSystem(AAV6) | 1Kit |
| Takara | 6672 | AAVpro?PackagingPlasmid(AAV1) | 1mgeach |
| Takara | 6234 | AAVpro?PackagingPlasmid(AAV2) | 1mgeach |
| Takara | 6664 | AAVpro?PackagingPlasmid(AAV5) | 1mgeach |
| Takara | 6665 | AAVpro?PackagingPlasmid(AAV6) | 1mgeach |
