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| ■ 制品內容E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells100 μl × 10pUC19 plasmid (0.1 ng/μl)10 μlSOC Medium*1 ml × 10 |
| *SOC Medium: 2% Ttryptone 0.5% Yeast extract 10 mM NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgSO410 mM MgCl2 20 mM Glucose |
| ■ 制品說明 |
| Takara公司在Hanahan's method基礎上進行了改良，制備出E. coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells，當用1 ng pUC19轉化100 μl細胞時，轉化效率＞1×106 cfu/μg。 E.coli HST04 dam-/dcm-是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，使DNA不被甲基化。使用本菌株轉化所得到的質粒，可以被對dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。 另外，dam、recA雙重突變的菌株是致死的，本菌株為recA+菌株。因此，易與帶有同源序列的外源DNA發生重組。本制品只適用于轉化已經構筑好的質粒, 而不適用于常規的克隆轉化。 |
| ■ 細胞濃度 |
| 1-2×109 bacteria/ml |
| ■ Genotype |
| E. coli HST04 dam-/dcm-： F-, ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15], rpsL( str), thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrA, dam, dcm |
| ■ 保存 |
| -80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，轉化效率將會降低。此時，在使用前，請使用附帶的pUC19 對照質粒來確認細胞的轉化效率。不能液氮保存。 |
| ■ 質量標準 |
| 轉入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate進行篩選。 轉化效率 : >1 x 106 colonies/μg pUC19 plasmid |
| ■ 注意事項 |
| 1. 將感受態細胞從-80℃冷凍取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 |
| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能會降低。 |
| 3. 當使用100 μl感受態細胞時，加入的高純度質粒DNA不要超過10 ng。否則轉化效率會降低。 |
| 4. 當改變感受態細胞使用體積或tube類型時，適當調整反應條件。例如，當使用1.5 ml microcentrifuge tubes時，42℃放置60秒而不是45秒。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養基，轉化效率可能會降低。 |
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH調整pH到7.5，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O，用1 N KOH調整pH到7.5，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| ·L-plates： 10 g Tryptone，5 g Yeast extract，5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH調整pH到7.5，添加agar到1.5%，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| 6. 不建議將解凍的感受態細胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結不可避免，將細胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉化效率可能會降低至少一個數量級。 |
| E.coliHST04dam-/dcm-CompetentCells | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | 9129 | E.coliHST04dam-/dcm-CompetentCells | 1Set(100μl×10支) |
