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商品名稱：PrimeScript II High Fidelity RT-PCR Kit
商品編號(hào)：SPU2021050494
上架時(shí)間：2022-01-06
| ■ 制品內(nèi)容 (50 次量*1) |
| PrimeScript II RT Enzyme Mix50 μl5×PrimeScript II Buffer200 μldNTP Mixture (10 mM each)100 μlOligo dT Primer (50 μM)50 μlRandom 6 mers (20 μM)50 μlPrimeSTAR GXL for RT-PCR100 μl5×PrimeSTAR GXL Buffer500 μlControl F-1 Primer*2 (20 μM)10 μlControl R-1 Primer*3 (20 μM)10 μlPositive Control RNA (2×105 copies/μl)20 μlRNase Free dH2O1ml *1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)20 μl、PCR反應(yīng)50 μl，2 Step RT-PCR時(shí)可使用50次。*2 Positive Control RNA用上游引物。*3 Positive Control RNA用下游引物。 |
| ■ 制品說明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種使用兩種引物擴(kuò)增目的DNA的方法。雖然原理上PCR法是擴(kuò)增DNA，RNA不能直接被擴(kuò)增，但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后擴(kuò)增 (RT-PCR)，PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。PrimeScript II High Fidelity RT-PCR Kit是一種對(duì)長鏈RNA及富含GC序列的RNA合成cDNA時(shí)具有高保真性的RT-PCR用試劑盒。本試劑盒中使用的PrimeScript II反轉(zhuǎn)錄酶是改良型的PrimeScript RTase，可在合成長鏈cDNA時(shí)發(fā)揮效力，同時(shí)PCR時(shí)使用了對(duì)長鏈及富含GC序列的cDNA擴(kuò)增時(shí)具有高保真性的DNA聚合酶PrimeSTAR GXL DNA Polymerase。因PrimeScript II RTase可很好地抑制由于引物錯(cuò)配引起的非特異性擴(kuò)增，即使使用高濃度的Oligo dT Primer進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)也不會(huì)導(dǎo)致cDNA合成時(shí)的阻害作用，因此使用高濃度的RNA作為模板也可進(jìn)行良好的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本試劑盒中使用PrimeScript II RTase與RNase Inhibitor的混合型PrimeScript II RT Enzyme Mix。另外，PrimeSTAR GXL DNA Polymerase克服了以往的高保真酶由于核酸濃度過高而存在的反應(yīng)阻害性，在高濃度核酸存在條件下也能發(fā)揮其效力，可以在更寬廣的RNA模板范圍內(nèi)獲得cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物。 本試劑盒具有以下優(yōu)點(diǎn):1. 能夠從長鏈RNA及富含GC序列的RNA中獲得錯(cuò)配率很低的cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物。2. 在42℃條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)也可以使具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA進(jìn)行良好的延伸。3. 反應(yīng)體系中Total RNA的使用范圍非常寬廣，便于使用。本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及PCR擴(kuò)增反應(yīng)所需要的全部試劑。并且，也可以進(jìn)行1 Step RT-PCR反應(yīng)。 |
| ■ 各種引物的序列 |
| 引物名稱各引物序列Random 6 mersPd (N)6Oligo dT PrimerTakara獨(dú)自開發(fā)的dT區(qū)域的序列Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
| ■ Positive Control RNA |
| 本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動(dòng)子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。 |
 |
| 圖1. Control RNA：使用Control Primer時(shí)所能擴(kuò)增的DNA片段 |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ 使用注意 |
| 1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等)，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。 2. 使用PrimeScript II RT Enzyme Mix、PrimeSTAR GXL for RT-PCR等酶類產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。 3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放入-20℃保存。 4. 為了防止Positive Control RNA分解，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。有條件的實(shí)驗(yàn)室最好保存于-70℃～-80℃。 5. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。 |
| PrimeScript?IIHighFidelityRT-PCRKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | R023A | PrimeScript?IIHighFidelityRT-PCRKit | 50次 |
| Takara | R023B(A×4) | PrimeScript?IIHighFidelityRT-PCRKit | 200次 |
400-0592-051
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