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商品名稱(chēng)：PrimeScript RT-PCR Kit
商品編號(hào)：SPU2021050491
上架時(shí)間：2022-01-06
| ■ 制品內(nèi)容 (Code No. RR014A ; 50 次量*1) |
| PrimeScript RTase (for 2 Step)25 μl5 × PrimeScript Buffer200 μlRNase Inhibitor (40 U/μl)25 μldNTP Mixture (10 mM each)150 μlOligo dT Primer (2.5 μM)50 μlRandom 6 mers (20 μM)50 μlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)25 μl10 × PCR BufferⅡ250 μlControl F-1 Primer*2 (20 μM)10 μlControl R-1 Primer*3 (20 μM)10 μlPositive Control RNA (2 × 105 copies/μl)20 μlRNase Free dH2O1 ml *1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)20 μl 、PCR反應(yīng)50 μl體系時(shí)可使用50次。*2 Positive Control RNA用上游引物。*3 Positive Control RNA用下游引物。 |
| ■ 制品說(shuō)明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種使用兩條引物在目的DNA序列兩側(cè)擴(kuò)增特異性DNA片段的過(guò)程。它是一種體外擴(kuò)增DNA的簡(jiǎn)單而有效的方法，但RNA不能直接被擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。PrimeScript RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能與高擴(kuò)增效率的2 Step RT-PCR試劑盒。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)使用了Takara Bio Inc.特別開(kāi)發(fā)的M-MLV由來(lái)的新型反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript RTase；PCR反應(yīng)使用了擴(kuò)增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS。本試劑盒具有以下優(yōu)點(diǎn)：1. 進(jìn)行高效的RT-PCR擴(kuò)增。2. 在標(biāo)準(zhǔn)的RNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度 (42℃) 下，便可使具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA進(jìn)行良好的延伸，可以避免RNA在高溫條件下的降解。3. 能有效抑制非特異性的PCR擴(kuò)增。本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及PCR擴(kuò)增反應(yīng)所需的全部試劑。 |
| ■ 各種引物的序列 |
| 引物名稱(chēng)各引物序列Random 6 mers pd (N)6Oligo dT Primer Takara Bio特別設(shè)計(jì)的dT區(qū)域*Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
| * 該序列和TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. : RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有與M13 Primer M4匹配的序列。 |
| ■ Positive Control RNA |
| 本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動(dòng)子下游插入長(zhǎng)約1.4 kb的pBR322來(lái)源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。 |
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| 圖1. Positive Control RNA：使用Control Primer可以擴(kuò)增462 bp的DNA片段 |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ RNA PCR 的原理 |
| PrimeScript RT-PCR Kit首先用PrimeScript RTase將RNA合成cDNA，再取一部分1st strand cDNA作為模板，由TaKaRa Ex Taq HS進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA的引物可以使用Random 6 mers、Oligo dT Primer或特異性下游引物。 |
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| 圖2. PrimeScript RT-PCR Kit原理圖 |
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| 圖3. PrimeScript RT-PCR Kit 的操作流程 |
| ■ 特點(diǎn) |
| RNA模板 適用于所有RNA擴(kuò)增片段大小 ～12 kb反轉(zhuǎn)錄酶 PrimeScript RTase (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)最適溫度42℃)DNA Polymerase TaKaRa Ex Taq HSRNase Inhibitor Kit中含有合成第一條cDNA鏈的引物 Random 6 mers、Oligo dT Primer和特異性下游引物 |
| ■ 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)Primer的選擇 |
| 反轉(zhuǎn)錄引物的選擇，應(yīng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)的具體情況，選擇以下三種引物，即：Random 6 mers、Oligo dT Primer或特異性下游引物。對(duì)沒(méi)有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的短鏈mRNA，上述三種引物都可以使用；一般情況下的反轉(zhuǎn)錄引物的選擇請(qǐng)參照以下說(shuō)明。 |
| Random 6 mers 適用于長(zhǎng)的或具有Hairpin構(gòu)造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內(nèi)的所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)都可使用本引物。Oligo dT Primer 適用于具有PolyA Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物的rRNA、tRNA以及某些種類(lèi)的真核生物的mRNA等不具有PolyA Tail)。特異性下游引物(PCR時(shí)的下游引物) 必須與模板序列互補(bǔ)，需了解Target序列。 |
| ■ 使用注意 |
| 1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。 2. 用PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex Taq HS等酶類(lèi)時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。 3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放入-20℃保存。 4. 為了防止Positive Control RNA分解，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。有條件的實(shí)驗(yàn)室最好保存于-70℃～-80℃。 5. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭，以防止樣品間污染。 |
| PrimeScript?RT-PCRKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝量 |
| Takara | RR014A | PrimeScript?RT-PCRKit | 50次 |
| Takara | RR014B(A×4) | PrimeScript?RT-PCRKit | 200次 |
400-0592-051
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