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商品名稱：PrimeScript RT-PCR Kit
商品編號：SPU2021050491
上架時間：2022-01-06
| ■ 制品內容 (Code No. RR014A ; 50 次量*1) |
| PrimeScript RTase (for 2 Step)25 μl5 × PrimeScript Buffer200 μlRNase Inhibitor (40 U/μl)25 μldNTP Mixture (10 mM each)150 μlOligo dT Primer (2.5 μM)50 μlRandom 6 mers (20 μM)50 μlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)25 μl10 × PCR BufferⅡ250 μlControl F-1 Primer*2 (20 μM)10 μlControl R-1 Primer*3 (20 μM)10 μlPositive Control RNA (2 × 105 copies/μl)20 μlRNase Free dH2O1 ml *1 反轉錄反應20 μl 、PCR反應50 μl體系時可使用50次。*2 Positive Control RNA用上游引物。*3 Positive Control RNA用下游引物。 |
| ■ 制品說明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈式反應) 是一種使用兩條引物在目的DNA序列兩側擴增特異性DNA片段的過程。它是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法，但RNA不能直接被擴增。經過反轉錄酶的作用把RNA反轉錄成cDNA后，PCR法便可應用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。PrimeScript RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能與高擴增效率的2 Step RT-PCR試劑盒。反轉錄反應使用了Takara Bio Inc.特別開發的M-MLV由來的新型反轉錄酶PrimeScript RTase；PCR反應使用了擴增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS。本試劑盒具有以下優點：1. 進行高效的RT-PCR擴增。2. 在標準的RNA反轉錄反應溫度 (42℃) 下，便可使具有復雜結構的RNA進行良好的延伸，可以避免RNA在高溫條件下的降解。3. 能有效抑制非特異性的PCR擴增。本試劑盒含有反轉錄反應及PCR擴增反應所需的全部試劑。 |
| ■ 各種引物的序列 |
| 引物名稱各引物序列Random 6 mers pd (N)6Oligo dT Primer Takara Bio特別設計的dT區域*Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
| * 該序列和TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. : RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有與M13 Primer M4匹配的序列。 |
| ■ Positive Control RNA |
| 本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質粒 (質粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經體外轉錄而得到的。 |
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| 圖1. Positive Control RNA：使用Control Primer可以擴增462 bp的DNA片段 |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ RNA PCR 的原理 |
| PrimeScript RT-PCR Kit首先用PrimeScript RTase將RNA合成cDNA，再取一部分1st strand cDNA作為模板，由TaKaRa Ex Taq HS進行PCR擴增。將RNA反轉錄成cDNA的引物可以使用Random 6 mers、Oligo dT Primer或特異性下游引物。 |
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| 圖2. PrimeScript RT-PCR Kit原理圖 |
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| 圖3. PrimeScript RT-PCR Kit 的操作流程 |
| ■ 特點 |
| RNA模板 適用于所有RNA擴增片段大小 ～12 kb反轉錄酶 PrimeScript RTase (反轉錄反應最適溫度42℃)DNA Polymerase TaKaRa Ex Taq HSRNase Inhibitor Kit中含有合成第一條cDNA鏈的引物 Random 6 mers、Oligo dT Primer和特異性下游引物 |
| ■ 反轉錄反應時Primer的選擇 |
| 反轉錄引物的選擇，應結合實驗的具體情況，選擇以下三種引物，即：Random 6 mers、Oligo dT Primer或特異性下游引物。對沒有發夾結構的短鏈mRNA，上述三種引物都可以使用；一般情況下的反轉錄引物的選擇請參照以下說明。 |
| Random 6 mers 適用于長的或具有Hairpin構造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內的所有RNA的反轉錄反應都可使用本引物。Oligo dT Primer 適用于具有PolyA Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物的rRNA、tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA等不具有PolyA Tail)。特異性下游引物(PCR時的下游引物) 必須與模板序列互補，需了解Target序列。 |
| ■ 使用注意 |
| 1. 當同時需要進行數次RT-PCR反應時，應先配制各種試劑的混合液，然后再分裝到每個反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或實驗之間產生的誤差。 2. 用PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex Taq HS等酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時應慢慢吸取。 3. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出，使用后也應立即放入-20℃保存。 4. 為了防止Positive Control RNA分解，應盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃～-80℃。 5. 分裝試劑時務必使用新的槍頭，以防止樣品間污染。 |
| PrimeScript?RT-PCRKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR014A | PrimeScript?RT-PCRKit | 50次 |
| Takara | RR014B(A×4) | PrimeScript?RT-PCRKit | 200次 |
