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商品名稱：TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
商品編號：SPU2021050499
上架時間：2022-01-06
| ■ 制品內容 (Code No.: RR024A : 50 次量) |
| AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl)50 μlRNase Free dH2O1 ml × 2 支RNase Inhibitor (40 U/μl)50 μlAMV-Optimized Taq (5 U/μl)50 μl10X One Step RNA PCR Buffer250 μldNTP Mixture (各10 mM)250 μlMgCl2 (25 mM)500 μlControl F-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用上游引物)25 μlControl R-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用下游引物)25 μlPositive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)25 μl *1：各種引物序列 |
| 引物名稱各引物序列Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
| *2：本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質粒 (質粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經體外轉錄而得到的。 |
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| 圖1. Positive Control RNA：進行Control實驗時所能擴增的DNA片段 |
| ■ 制品說明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈式反應) 是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA，RNA不能直接被擴增，但是經過反轉錄酶的作用把RNA反轉錄成cDNA后，PCR法便可應用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。本試劑盒采用了一步反應法 (One Step法) 完成RT-PCR反應。RNA→cDNA→PCR反應操作在同一反應體系中進行，反應中途不需添加任何試劑，就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來的反轉錄酶從RNA反轉錄為cDNA，再由AMV-Optimized Taq (根據LA PCR技術研制) 擴增cDNA的全部反應。常規RT-PCR試劑盒采用2 step PCR進行連續反應，并分別配制反應液，這些操作增加了污染的可能性，而本試劑盒可降低污染，并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本試劑盒中含有進行One Step法RT-PCR反應用的全部試劑，可以簡便而有效地對RNA進行擴增分析。 |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ One Step RT- PCR的原理 |
| TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反應管中完成由AMV 反轉錄酶從RNA反轉錄為cDNA，再使用AMV-Optimized Taq擴增此cDNA的RT-PCR反應。 |
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| 圖2. One Step RT-PCR原理圖 |
| ■ 特點 |
| RNA模板 適用于所有RNA 擴增片段大小 ～5.6 kb 反轉錄酶 AMV Reverse Transcriptase XL (反轉錄反應溫度在42℃～60℃) 反轉錄引物 特異性下游引物(PCR擴增反應用反義鏈引物)（不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer） DNA Polymerase AMV-Optimized Taq RNase Inhibitor Kit中含有 操作 在同一反應管中連續進行 (PCR反應前加熱使RTase失活) |
| ■ 注意事項 |
| 1. 當同時需要進行數次RT-PCR反應時，應先配制各種試劑的混合液(Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等)，然后再分裝到每個反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或實驗之間產生的誤差。 2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時應慢慢吸取。 3. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出，使用后也應立即放回-20℃中保存。 4. 為了防止Positive Control RNA分解，應盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃～-80℃。 5. 分裝試劑時務必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。 6. 使用本試劑盒進行反轉錄反應時必須使用特異性的反轉錄引物，Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。 |
| TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV) | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR024A | TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV) | 50次 |
| Takara | RR024B(A×2) | TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV) | 100次 |
