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熒光定量PCR反應體系。參加PCR反應的物質為模板、引物、耐熱DNA聚合酶、三磷酸脫氧核苷酸和鎂離子，其中關鍵步驟是最佳引物的設計。模板核酸：模板(靶基因或樣品DNA)核酸的量與純化程度是PCR成敗與否的關鍵環節之一。一般臨床檢測標本，可采用快速簡便的方法溶解細胞，裂解病原體，消化除去染色體的蛋白質使靶基因游離，直接用于PCR擴增。DNA模板提取一般采用異硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)降解RNA。引物：PCR產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈作引物。每條引物鏈的濃度為0.1~1μmol或10-100pmol，以反應所需要的最低引物量的濃度為好。
PCR儀的使用方法：1、將DNA加熱（至90~95℃）變性， 將雙股的DNA加熱后轉為單股DNA以做為復制的模板。2、則是令 Primers于一定的溫度下（冷卻至55~60℃）附著于模板DNA兩端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下（加熱至70~75℃）進行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。標準PCR儀也叫做終點PCR儀，是指目的基因僅經過預變性、變性、退火、延伸階段產生大量的核酸序列的PCR儀，PE-Cetus公司推出的世界上第一臺PCR自動化熱循環儀屬于此種。根據PCR退火溫度和擴增條件（細胞內/外），標準PCR又可以分為三類：普通PCR、梯度PCR和原位PCR。PCR是分子生物學研究極其重要的工具，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，基本原理是在試管中模擬細胞內的DNA復制，即人為創造核酸半保留復制條件，使目的DNA在細胞外完成擴增的過程，它可被看作是生物體外的特殊DNA復制。
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