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-關于胎牛血清-

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
胎牛血清是母牛在懷孕五至八月齡胎時,將胎牛取出并進行心臟穿刺取血。穿刺取血可大程度的避免外界的污染。而新生牛血清是從剛出生到2周內的新生牛靜脈采血。和新生牛血清相比,胎牛血清顯然產量低,成本高。
胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關注的一個問題,經過專業人員從其成分中分析,在保證質量的前提下,胎牛血清的正確存放與解凍的方法,總結如下:
如何儲存和解凍胎牛血清
才不會使產品質量受損?
● 冷凍 未拆封的胎牛血清,一般情況下應存放于-10℃至-20℃,在產品規定的效期內均可使用,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝胎牛血清至合適大小的無菌離心管內,再放回冷凍。
● 溶解 將胎牛血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解。完全融解后建議盡快使用,若長時間儲存在2-8℃,胎牛血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。
總而言之:胎牛血清推薦在-10至-20℃條件儲存,并避免反復凍融
胎牛血清中絮狀沉淀是什么
怎么處理?
● 是什么 胎牛血清中沉淀物的出現有許多種原因,但普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解凍后,也會存在于胎牛血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本身的質量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將胎牛血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
● 怎么處理
1.將冷凍保存的胎牛血清取出后,置4℃冰箱靜止過夜;
2.待胎牛血清融化后,上下顛倒輕輕混勻,繼續4℃2-3小時;
3.輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右;
4.低速離心5分鐘,去掉沉淀。
● 建議 解凍胎牛血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,胎牛血清會變得混濁,同時胎牛血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響胎牛血清的質量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。
如何避免血清中產生沉淀?
1.胎牛血清解凍時,請隨時將胎牛血清搖晃均勻,使溫度及成分均一;
2.胎牛血清分裝凍存時,須將其規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡);
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍,較大的溫差,易造成蛋白質凝結而發生沉淀;
4.切勿將胎牛血清置于37℃過長時間,否則可能使之渾濁,其中一些不穩定的組分也會因此受到影響,終降低胎牛血清的品質;
5.胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟;
6.若必須做胎牛血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且保持搖晃均勻。溫度過高、時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增加。
為什么要熱滅活血清
是否有必要做熱滅活?
● 熱滅活 加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES 細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活胎牛血清。
● 是否有必要做熱滅活 實驗顯示,經過正確處理的熱滅活胎牛血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的胎牛血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了胎牛血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的胎牛血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是胎牛血清遭受污染,而把胎牛血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保胎牛血清的質量。
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